Медична генетика - В. М. Запорожан 2005

Методи діагностики спадкових хвороб
Цитогенетичні методи
Визначення статевого хроматину

Це експрес-метод, який дозволяє визначити кількість статевих хромосом, але потребує подальшого каріотипування для підтвердження діагнозу.

Розроблено Методи визначення Х-статевого хроматину (тілець Барра) і Y-статевого хромати^ну.

Х-статевий Хроматин. Тільця Барра — це спіралізована Х-хромосома. Одна з Х-хромосом у плодів жіночої статі інактивується і спіралізується на 16-19-ту добу ембріонального розвитку, а друга залишається активною. Спіралізована Х-хромосома помітна в ядрах соматичних клітин у вигляді темної, добре забарвленої грудки (рис. 10.6). Тільця Барра виявляють в епітеліальних клітинах із слизової оболонки Щоки (у букальному зскрібку).

Методика визначення статевого хроматину в букальному зскрібку така. Після попереднього полоскання ротової порожнини стоматологічним шпателем беруть зскрібок епітелію внутрішньої поверхні щоки біля корінних зубів. Зскрібок наноситься рівномірним шаром на предметне скло, забарвлюється протягом 2 хв ацетоорсеїном, потім накривається покривним склом. Надлишки барвника видаляють за допомогою фільтрувального паперу. Підрахунок кількості тілець статевого хроматину проводять під імерсією в круглих або овальних ядрах з непорушеною ядерною мембраною. В епітеліальних клітинах грудки статевого хроматину розташовуються під ядерною мембраною. В жінок у нормі статевий хроматин знаходять більше як у 20 % клітин. У чоловіків статевий хроматин у нормі відсутній.

Статевий хроматин можна виявляти також у мазках крові, забарвлених за Романовським — Гімзою. У нейтрофільних лейкоцитах тільця Барра мають вигляд барабанних паличок. У нормі в жінок барабанні палички виявляються в 1-2 % лейкоцитів, у чоловіків — відсутні.

Метод використовують:

— для експрес-діагностики хромосомних хвороб, пов’язаних зі зміною кількості Х-хромосом.

Рис. 10.6. Статевий хроматин у клітинах епітелію слизової оболонки щоки (грудки статевого хроматину відмічено стрілками)

Кількість Х-хромосом на одиницю більше кількості грудок статевого хроматину і визначається за формулою:

N = n + 1,

де N — кількість Х-хромосом; n — кількість грудок статевого хроматину;

— як експрес-метод діагностики статі при гермафродитизмі;

— у судовій медицині для визначення статевої належності фрагментів трупа людини (тільця Барра добре зберігаються в хрящовій тканині).

Y-статевий хроматин. Y-хроматин — це інтенсивно флуоресціююча ділянка довгого плеча Y-Хромосоми в інтерфазних ядрах. Його можна визначити в букальному зскрібку, лейкоцитах периферичної крові за такою методикою. Препарат забарвлюють флуоресцентним барвником акрихін-іпритом. Під люмінесцентним мікроскопом Y-хроматин виявляється в ядрі клітини як яскрава пляма діаметром 0,3-1,0 мкм. У чоловіків в нормі одна грудка Y-хроматину. Метод використовується для експрес-діагностики синдрому полісомії Y.