ОБЩАЯ И ПИЩЕВАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ ЧАСТЬ I - Л. В. Красникова - 2016

11. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА ПОМЕЩЕНИЙ

Цель работы: ознакомиться с методами микробиологического исследования воздуха помещений.

Оборудование, реактивы: аппарат Кротова, стерильные чашки Петри, питательные среды - мясопептонный агар, сусло-агар.

Воздух производственных помещений на предприятиях пищевой промышленности может стать источником инфицирования посторонними микроорганизмами сырья и готовой продукции. Обычно в воздухе находятся различные микрококки, сарцины, неспорообразующие палочки, дрожжи, споры бактерий и мицелиальных грибов, могут встречаться и болезнетворные микроорганизмы.

При микробиологическом исследовании в 1 м воздуха определяют общее количество микроорганизмов, наличие плесневых грибов, а при необходимости - группу санитарно-показательных микроорганизмов: гемолитический стрептококк (посев на кровяной агар) и золотистый стафилококк (посев на желточно-солевой агар).

Для определения количества микроорганизмов в воздухе используют различные методы. Наиболее распространенными являются седиментационный и аспирационный методы.

11.1. Седиментационный метод

Седиментационный метод (метод Коха) основан на оседании пылинок и капель вместе с микроорганизмами на поверхность питательной среды в открытых чашках Петри. Контроль воздуха помещений проводят следующим образом. Готовят две стерильные чашки Петри. Одну из них заливают расплавленным мясопептонным агаром (МПА), другую - сусло-агаром (СА). После застывания агара чашки переносят в исследуемое помещение, открывают крышки, сдвигают их на края бортиков так, чтобы вся поверхность питательной среды была открыта полностью. Чашки оставляют открытыми в течение 5, 10 или 15 мин в зависимости от степени загрязненности воздуха. Затем чашки закрывают, переворачивают вверх дном и помещают в термостат.

Внимание! Если чашки не переворачивать вверх дном, то конденсационная влага, выделяющаяся из агаризованной среды, будет попадать с внутренней стороны крышки на поверхность среды и размывать колонии микроорганизмов.

Чашки с МПА выдерживают при температуре 37 °С в течение 24 ч, а чашки с СА - при 30 °С в течение 48 ч.

Для определения количества микроорганизмов в 1 м2 воздуха пользуются формулой В.Л. Омелянского, согласно которой на поверхность чашки площадью 100 см2 оседает в течение 5 мин столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 дм3 воздуха:

X = а • 100 • 5 • 100/ST,

где а - число колоний, выросших на чашке; 100 - пересчет площади чашки на 100 см2; 5 - экспозиция чашки по Омелянскому, мин; 100 - пересчет на 1 м3 воздуха; S - площадь чашки Петри (78,5 см2); Т - время экспозиции открытой чашки, мин.

11.2. Аспирационный метод

Аспирационный метод (метод Кротова) основан на использовании щелевого аппарата конструкции Ю. А. Кротова. Прибор, смонтированный в портативном ящике, состоит из узла для отбора пробы, куда на специальную площадку помещают чашку Петри без крышки, электромотора, вентилятора и ротаметра. Вентилятор, вращаясь с частотой 4-5 тыс. об/мин, засасывает воздух, струя которого ударяется о поверхность питательной среды в чашке Петри, оставляя на ней мироорганизмы. Воздух выходит из прибора через ротаметр. Для равномерного распределения микроорганизмов на поверхности среды диск с чашкой вращается с частотой 60 об/мин. Скорость протягивания воздуха составляет 25 дм3/мин. При определении общей численности бактерий количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм3. Засеянные чашки вынимают из аппарата, закрывают их крышками, помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С, затем вынимают и оставляют при комнатной температуре на 24 ч. Подсчитывают число выросших колоний и производят перерасчет на 1 м воздуха:

X = а/1000 • V,

где а - количество выросших на чашке колоний; V - объем пропущенного через прибор воздуха; 1000 - искомый объем воздуха, дм3.

Кроме количественной, дается качественная характеристика микрофлоры воздуха. Для этого проводят описание колоний бактерий, выросших на чашках Петри, и готовят микроскопические препараты из этих колоний. Описание колоний бактерий проводят, как это указано в разд. 5.3.

Результаты исследования оформляют в виде таблицы по форме табл. 11.1, микроскопические препараты из колоний зарисовывают в тетрадь.

Таблица 11.1. Изучение морфологии колоний бактерий, выросших на МПА

Характеристика колонии

Размер

Форма

Профиль

Край

Поверхность

Цвет

Структура

Плесневые грибы, выросшие в чашке Петри с сусло-агаром, рассматривают визуально и под микроскопом с объективом 8х. Пользуясь описанием грибов, приведенным в разделе 5, определяют их принадлежность к определенному роду.

Санитарное состояние воздуха обследуемого помещения оценивают согласно санитарным нормам и правилам. В табл. 11.2 приведен фрагмент формы журнала санитарно-микробиологического контроля на предприятиях пищевой промышленности.

Таблица 11.2. Санитарно-микробиологический контроль на предприятии

Объект контроля

Микробиологическое определение

Допустимая норма

Периодичность контроля

Воздух цеха

Общее микробное число

200 колоний на чашке с МПА при седиментационном методе после 20 мин экспозиции; 150 колоний - при просасывании 100 дм3 аппаратом Кротова

2 раза в месяц

Воздух цеха

Споры плесневых грибов

20 колоний на чашке с СА после 20 мин экспозиции и 15 колоний - по методу Кротова

2 раза в месяц

Пользуясь данными, приведенными в табл. 11.2, дать заключение о микробиологической чистоте воздуха обследованного помещения.

Контрольные вопросы

1. Какими методами производят микробиологический анализ воздуха помещений?

2. Каковы критерии санитарной оценки воздуха производственных помещений на предприятиях пищевой промышленности?

3. Какие микроорганизмы наиболее часто встречаются в воздухе помещений?