Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Методы определения молекулярной массы белков
Определение молекулярной массы белков методом ДСН-гельэлектрофореза

Додецилсульфат натрия (ДСН) - сильно денатурирующий агент. Применение ДСН позволяет придать всем белковым молекулам сходную структуру и сохранить различия в их молекулярной массе.

В полиакриламидном геле при нейтральном рН в 1%-ном ДСН и 0.1М меркаптоэтаноле большинство многоцепочечных белков связывают ДСН и диссоциируют. Имеющиеся Дисульфидные связи разрушаются при этом меркаптоэтанолом. Вторичная структура белка разрушается, в результате чего комплексы белка с ДСН приобретают структуру статического клубка, т.е. после обработкой ДСН молекулы всех белков приобретают примерно одинаковую структуру и имеют одинаковое отношение заряд/масса. Связано это с тем, что количество связывающегося с белком ДСН примерно постоянно и составляет около 1.4 г ДСН на 1г белка. Как следствие, заряд покрытой ДСН молекулы белка определяется фактически не аминокислотными остатками пептидной цепи, а находящимися на поверхности молекулами ДСН, которые легко диссоциируют В водных растворах и несут на себе отрицательный заряд.

Гидродинамические исследования показали, что комплексы белок-ДСН являются вытянутыми элипсоидами или стержнями постоянного сечения, с диаметром равным = 18Å.

Установлено, что при гельэлектрофорезе комплексов белков с ДСН наблюдается линейная зависимость между их электрофоретической подвижностью (μ) и логарифмом молекулярной массы:

μ = b - alg MM

Наличие этой зависимости позволяет определять молекулярную массу неизвестных белков, при наличии калибровочных кривых в соответствующем диапазоне масс. Погрешность Определения молекулярных масс таким способом составляет около 10%.