Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Общие условия ферментативного гидролиза
Завершение ферментативной реакции

Ферментативная реакция может быть остановлена различными приемами, самый простой из которых — замораживание с последующим лиофильным высушиванием. Другим приемом является изменение pH, например подкисление, поскольку большинство ферментов в этих условиях теряют активность. В некоторых случаях, в особенности при проведении ограниченного протеолиза, реакцию целесообразно прерывать с помощью специфических ингибиторов. Сведения о специфических ингибиторах можно найти в соответствующих разделах, посвященных каждому ферменту. Известны три класса протеолитических ферментов: сериновые протеазы, сульфгидрильные протеазы и металлоферменты. Специфическими ингибиторами сериновых протеаз являются диизопропилфторофосфат (ДФФ) и фенилметилсульфонилфторид (ФМСФ). Применение последнего предпочтительнее, поскольку ДФФ высоко токсичен. Обычно готовят 1 М растворы ДФФ в безводном пропандиоле и ФМСФ — в изопропаноле. Ферментативную реакцию останавливают добавлением ингибитора до достижения концентрации 1 ммоль/л. Гидролиз сульфгидрильными протеазами останавливают добавлением небольшого избытка алкилирующих агентов, например иодоуксусной кислоты, по отношению к сульфгидрильному реагенту, добавленному для активации фермента. Металлоферменты ингибируют добавлением хелатирующих реагентов, например 10 мМ ЭДТА.