Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Применение масс-спектрометрии электронного удара для определения аминокислотной последовательности пептидов и белков
Способы подготовки проб

Присутствие в белковой молекуле разнообразных функциональных групп было непосредственной причиной того, что на разработку совершенных методов химического превращения водорастворимых полярных пептидов неизвестной структуры в растворимые в хлороформе летучие производные, поддающиеся исследованию методом масс-спектрометрии электронного удара, ушло более десяти лет. Систематическое исследование различных способов химической модификации пептидов [16—-20] привело к созданию универсального метода получения летучих производных пептидов для масс-спектрометрнческого анализа. Метод дает возможность модифицировать Пептиды непосредственно в смеси, содержащей 5—100 нмоль каждого из компонентов [21, 22] независимо от их аминокислотной последовательности. Схема такого превращения пептидов в N-ацетил-N,O,S-перметилпроизводные изображена на рис. 19.1. Аргининсодержащие соединения перед такой химической модификацией обычно переводят в орнитилпептиды (рис. 19.2) [22]. Для Определения аргининсодержащих пептидов в исследуемой пробе, часть смеси подвергают аминокислотному анализу или аналитическому электрофорезу с последующим окрашиванием [23] (разд. 8.14,3). Использование последнего метода в современной стратегии определения аминокислотной последовательности представляется достаточно простым, поскольку аналитическим электрофорезом контролируются этапы хроматографического разделения.