Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Традиционная стратегия определения структуры белков
Фракционирование растворимых пептидов
Хроматография на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой

Элюирование пептидов с ДЭАЭ-целлюлозы (диэтиламиноэтилцеллюлозы) проводят в повышающемся градиенте концентрации иона бикарбоната [55] (табл. 10.5). При pH 8,0 С-концевые карбоксильные группы и карбоксильные группы боковых цепей аспарагиновой и глутаминовой кислот ионизированы, в то время как боковые группы аргинина и лизина протопированы. Имидазольное кольцо гистидина полностью депротонировано, а его N-концевая аминогруппа депротопирована на 50%. Пептиды разделяются в соответствии с их суммарным зарядом при pH 8,0.

Первыми элюируются основные пептиды, затем нейтральные и кислые; при нанесении образца в растворе низкой ионной силы и последующем элюировании таким же раствором может быть достигнуто хорошее Разделение основных пептидов. Такого рода «гидрофобные» взаимодействия с матрицей позволяют разделять структурно близкие пептиды, различающиеся только нейтральными аминокислотами.

Контролируют разделение пептидов по поглощению элюата при 280 и 230 им и с помощью метода аналитического электрофореза на бумаге. В соответствии с полученными данными фракции объединяют и высушивают па роторном испарителе.