Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Традиционная стратегия определения структуры белков
Фракционирование растворимых пептидов
Хроматография на колонке с дауэксом-50

Элюирование пептидов с колонки, заполненной смолой дауэкс-50 (сульфополистирол), осуществляется с помощью повышающегося градиента pH и концентрации пиридина [58, -60] (детали приведены в табл. 10.5). При pH 2 карбоксильные группы С-концевых остатков и боковых цепей аспарагиновой и глутаминовой кислот протонированы, как и N-концевые аминогруппы и боковые цепи аргинина, лизина, гистидина. В этих условиях Пептиды сорбируются на сульфогруппах смолы. При повышении рН карбоксильные группы ионизируются и пептиды отделяются от смолы. Таким образом, фракционирование пептидов происходит в соответствии с их суммарным зарядом и рК карбоксильных групп. Первыми элюируются кислые пептиды, затем нейтральные и основные. Нейтральные пептиды сходят с колонки обычно двумя группами: сначала «истинно» нейтральные, не содержащие внутренних основных или кислотных остатков, а затем пептиды, внутренние заряды которых компенсированы. Это деление обусловливается более высоким значением рК карбоксильных групп боковых цепей по сравнению с карбоксильными группами С-концевых остатков. Крупные, гидрофобные и очень основные пептиды (с положительными зарядами от нескольких групп) обычно элюируются с низким выходом. Поскольку пиридин «непрозрачен» в ультрафиолете при 230 и 280 нм, кривые элюирования пептидов строятся по данным анализа небольших порций полученных фракций методом высоковольтного электрофореза на бумаге при pH 6,5; по результатам анализа фракции объединяют и концентрируют на роторном испарителе.