Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Подготовка исследуемого материала для гидролиза
Окисление белков и пептидов надмуравьиной кислотой

SH-группы остатков цистеина и существующие исходно или возникающие в ходе реакции Дисульфидные связи могут стать источником артефактов при полном или частичном гидролизе исследуемых белков и пептидов. Дисульфидные мостики, возникающие в результате окисления SH-групп, могут: а) неспецифически расщепиться В ходе гидролиза или б) при ферментативном гидролизе обусловливать образование фрагментов сложной структуры.

В связи с этим для предупреждения нежелательных побочных реакций перед частичным или полным гидролизом рекомендуется исследуемый материал предварительно окислять или восстанавливать.

К 9 мл 80%-ной муравьиной кислоты прибавляют 1 мл 30%-ной перекиси водорода и оставляют смесь на 30 мин при 4°С. В полученной надмуравьиной кислоте растворяют исследуемый материал, инкубируют при 4°С 60 мин и упаривают в ротационном испарителе при низкой температуре. Сухой остаток растворяют или суспендируют в небольшом объеме дистиллированной воды и вновь упаривают.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При окислении надмуравьиной кислотой остатки цистеина или цистина превращаются в стабильную цистеиновую кислоту, остаток метионина — в стабильный метионинсульфон, а Тирозин и Триптофан полностью разрушаются.

2. Если исследуемый материал (например, высокомолекулярный белок) не растворяется в надмуравьиной кислоте, то его суспендируют в ней и инкубируют в течение 3—5 ч при 4° С с перемешиванием.