Основы биохимической инженерии Часть 1 - Бейли Дж., Оллис Д. 1989

Молекулярная генетика и системы регуляции
Технология рекомбинантных ДНК
Заключение

Приведенный в табл. 6.8 перечень основных этапов синтеза белка с помощью рекомбинантных ДНК может служить кратким обзором темы настоящего раздела. Запомните, что клонирование необходимого гена и его экспрессия эффективно выполняются как отдельные последовательные операции. Следует еще раз подчеркнуть необходимость постоянного контроля любых превращений ДНК путем Определения нуклеотидной последовательности и изучения фрагментов, образующихся при расщеплении рестриктазами.

Объем нашей книги позволяет изложить тему этого раздела только в очень сжатой форме. Принимая во внимание ту большую роль, которую будет играть Технология рекомбинантных ДНК в будущем, технологу-биохимику необходимо значительно глубже изучить основы молекулярной биологии и соответствующей методологии. Знание этих отраслей науки необходимо при знакомстве с современной биологической литературой, а также при разработке в сотрудничестве с молекулярными биологами оптимальных организмов и процессов. Факторы, определяющие продуктивность рекомбинантных популяций (уровни экспрессии гена, активности внутриклеточных протеаз, генетическая стабильность и т. п.), зависят от нуклеотидной последовательности вектора, генетических свойств Клетки-хозяина, состава среды, конструкции биореактора и условий его работы. Для понимания этих зависимостей, а также различных взаимосвязей в генетически видоизмененном организме необходимы совместные усилия специалистов в области биохимической технологии и молекулярной биологии.

Таблица 6.8. Последовательность этапов работы по клонированию гена и экспрессии соответствующего белка методами технологии рекомбинантных ДНК

1. Получение ДНК

2. Введение ДНК в плазмидный вектор

3. Трансформация

4. Обнаружение необходимого клона

5. Выращивание культуры и выделение плазмид

6. Определение нуклеотидной последовательности клонированного фрагмента ДНК

7. Конструирование и построение Плазмиды для экспрессии

8. Трансформация

9. Обнаружение необходимого клона

10. Выращивание культуры и выделение плазмид

11. Проверка нуклеотидной последовательности ДНК

12. Трансформация

13. Выращивание культуры для производства белка