Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с низкой специфичностью
Папаин

Папаин — SH-фермент, выделенный из латекса дынного дерева. Подробную информацию о свойствах этого фермента можно найти в работе [32]. Фермент выпускается рядом фирм.

3.6.4.1. Специфичность и условия гидролиза.

Специфичность. Субстратная специфичность папаина подробно изучена в работе [85]. Показано, что фермент содержит достаточно протяженный участок связывания, причем Гидролиз специфической связи происходит в результате взаимодействия с одним из фрагментов этого участка. Участок связывания обладает повышенным сродством к двум последовательно расположенным остаткам фенилаланина в субстрате [32]. В целом папаин гидролизует самые разнообразные пептидные связи, и, следовательно, результат гидролиза практически непредсказуем.

Папаин применялся для получения крупных фрагментов нативных белков, например иммуноглобулинов [79], миозина [63], экстрацеллюлярного фрагмента антигенов гистосовместимости человека [80].

Условия гидролиза. Папаин проявляет максимум активности в диапазоне pH 5—7,5, причем активацию фермента проводят в присутствии сульфгидрильных реагентов. Гидролиз проводят в 0,2 М пиридин-ацетатном буфере (pH 6,5), содержащем 1% (по объему) 2,3-димеркаптопропан-1-ола, в течение 1 ч при 37 °С и соотношении фермент : субстрат—1 : 50 (по объему) [84]. Папаин легко инактивируется при окислении в присутствии низких концентраций цистеина, солями тяжелых металлов или цианат-ионами [97]. Папаин устойчив в присутствии мочевины, причем активность сохраняется даже в 8 М растворе мочевины, однако раствор последней должен быть тщательно деионизирован, чтобы исключить инактивирующее действие цианат-ионов.