Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Определение состава белковых олигомеров. Получение мономеров и полипептидных цепей
Идентификация мономеров

В большинстве случаев первым шагом в идентификации мономеров является диссоциация исходного олигомера. Диссоциацию целесообразно проводить в мягких условиях, иногда для этого достаточно изменения pH, но чаще всего необходимо присутствие денатурирующих агентов — мочевины, гуанидингидрохлорида, додецилсульфата натрия (ДСН). Диссоциации олигомера за счет электростатического отталкивания мономеров способствует химическая модификация олигомера, например обработка ангидридами дикарбоновых кислот (разд. 1.4.3 и 1.4.4).

При идентификации мономера необходимо учитывать возможное присутствие в нем дисульфидных связей. При наличии в мономере тиольной группы в определенных условиях может наблюдаться как внутри-, так и межцепочечный дисульфидный обмен, что приводит к искажению хроматографических или электрофоретических характеристик. Подобные осложнения возникают и в том случае, если мономеры с восстановленными дисульфидными связями находятся в растворе, не содержащем восстановителя (например, 0,05 М 2-меркаптоэганола). После восстановления дисульфидных связей рекомендуется перевести остатки цистеина в стабильные производные путем алкилирования (разд. 1.5.1) иодоацетамидом без изменения суммарного заряда белка или иодоуксусной кислотой, несущей отрицательный заряд (разд. 2.2.1). Введение дополнительного отрицательного заряда повышает растворимость белка при нейтральных pH и вместе с тем вносит различный вклад в суммарный заряд мономеров. Алкилирование цистеина — реакция необратимая, и, следовательно, модифицированные остатки цистеина препятствуют сборке исходного олигомера (разд. 1.4.4). Поскольку при хранении в растворе Белки склонны к агрегации, целесообразно работать только со свежеприготовленными растворами.