Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Определение С-концевой последовательности аминокислот
Выделение и идентификация С-концевых пептидов
Твердофазные смолы

Создание твердофазных носителей для анализа последовательности [55] стимулировало разработку мощного метода селективного выделения С-концевых пептидов. В принципе можно селективно присоединить белок к смоле через С-концевой карбоксил белка, химически или ферментативно расщепить иммобилизованный белок и селективно выделить С-концевой пептид, поскольку после гидролиза только он останется присоединенным к смоле. Однако на практике при активации С-концевого карбоксила активируются и карбоксильные группы боковых цепей Asp и Glu, которые затем связываются с носителем [51], что ограничивает возможности использования таких смол в качестве общего метода селективного выделения С-концевых фрагментов белков.

Class="center">

РИС. 18.1. Методика избирательного присоединения к носителю пептидов бромоцианового гидролизата. В присутствии ТФУ остаток HSer превращается в лактон HSer. При аминолизе лактона пептид конденсируется с носителем.

Расщепление белков бромоцианом с последующей конденсацией HSer-содержащих пептидов на твердофазном носителе лежит в основе селективного выделения HSer-содержащих пептидов из смесей. Метод включает лактонизацию остатков HSer обработкой ТФУ и последующий аминолиз HSer-лактона путем взаимодействия с аминогруппами смолы [37] (рис. 18.1).

HSer-содержащие Пептиды с высоким выходом присоединяются к носителю карбоксильной группой пептида без предварительной защиты N- или С-концевых аминокислот. Этот метод можно использовать для отделения С-концевых HSer-содержащих пептидов из ферментативных гидролизатов крупных бромоциановых пептидов [51], а также для удаления HSer-содержащих пептидов от С-концевого пептида, в котором отсутствует эта аминокислота [37]. Присоединение очень больших бромоциановых пептидов может быть затруднено (малые выходы) из-за их плохой растворимости.