Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидов химическими методами
Частичный кислотный гидролиз

Частичный кислотный Гидролиз пептидных связей проводят в более мягких условиях по сравнению с исчерпывающим гидролизом до свободных аминокислот [101]. С целью фрагментации полипептидных цепей применяются два варианта Методики: частичный гидролиз концентрированной соляной кислотой и гидролиз разбавленными кислотами. Относительная скорость гидролиза пептидной связи зависит от стерического и электростатического факторов. Показано, что наиболее устойчивы пептидные связи валина и лейцина [186], в особенности в дипептидах, образованных двумя разветвленными аминокислотами (например, Val-Іle и Ilе-Ilе). Можно полагать, что положительно заряженные основные группы будут отталкивать ион водорода, и именно это объясняет устойчивость дипептидов, накапливающихся в реакционной смеси к концу гидролиза.

Наиболее часто применяется Соляная кислота, в специальных случаях — уксусная кислота в смеси с другими кислотами. Условия частичного кислотного гидролиза белков описаны в табл. 2.1.

Кислотный гидролиз идет не очень специфично с образованием гетерогенной смеси фрагментов. Например, при гидролизе А- и В-цепей инсулина [159] и лизоцима [190] было получено множество ди- и трипептидов, которые удалось выделить и охарактеризовать. Хотя секвенирование небольших пептидов не составляет проблемы (при условии, что их удалось выделить), частичный кислотный гидролиз редко используется на практике, поскольку В настоящее время имеются быстрые и достоверные методы секвенирования довольно крупных фрагментов.