Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976
Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение N-концевых групп 2,4-динитрофторбензольным методом
Динитрофенилирование белков
Белок обрабатывается ДНФБ в слабощелочной среде при комнатной температуре.
1 г белка растворяют или суспендируют в 10 мл 10%-ного раствора NaHCО3 и добавляют 2 объема 5%-ного раствора ДНФБ в этаноле. Реакционную смесь встряхивают в темноте при комнатной температуре в течение 4—72 ч. Продолжительность инкубации зависит от растворимости и реакционноспособности исследуемого белка. Если реакция идет в гетерогенной фазе, т. е. динитрофенилируют малорастворимое вещество, то лучше увеличить время инкубации и сравнить результаты, получаемые при динитрофенилировании в течение 24, 48 и 72 ч. Однако если реакция идет в гомогенной фазе, т. е. динитрофенилируют растворимый в бикарбонате белок или белок не выпадает в осадок после добавления спиртового раствора ДНФБ (или образуется лишь небольшой осадок), то реакция заканчивается за 2—4 ч. По окончании реакции раствор или суспензию подкисляют несколькими каплями 0,6 н. НСl. Осадок отделяют центрифугированием и промывают сначала смесью этанол— эфир (1 : 1) и затем эфиром. ДНФ-белок хранят в темном месте в вакуумном эксикаторе.
Последнее обновление: 05/02/2024
Редакционная и учебная адаптация: Данный материал сведен на основе первоисточника/оригинального текста. Команда проекта осуществила редакционную обзорную обработку, исправление технических неточностей, структурирование разделов и адаптацию содержания к учебному формату.
Что было обработано:
- устранение форматных дефектов (OCR-ошибки, разрывы структуры, дефектные символы);
- редакционное упорядочивание содержания;
- унификация терминов в соответствии с академическими источниками;
- проверка соответствия фактических утверждений текста первоисточнику.
Все упоминания об авторе, годе издания и происхождении первичного текста сохранены в соответствии с источником.