Practical Protein Chemistry - A. Darbre 1989

Methods for Solid-Phase Amino Acid Sequence Analysis
Discussion
Solid-Phase Analysis of Small Peptides

Методы твердофазного анализа применимы почти ко всем типам пептидов. Они разработаны для пептидов, содержащих до 30 аминокислотных остатков, но могут быть использованы для анализа и более крупных пептидов и белков. Обязательные стадии включают: 1) присоединение пептидов через а- и ε-аминогруппы к носителям на основе полистирола или стекла путем активации n-фенилендиизотиоцианатом и 2) присоединение через С-концевую карбоксильную группу активацией водорастворимыми карбодиимидами. Наиболее полезными носителями оказались аминополистирол и 3-аминопропилстекло. При использовании носителей на основе стекол в продуктах отщепления присутствует меньше примесей, поэтому в последние годы они стали предпочтительными. Выход на стадии присоединения к носителям составляет 60—90% ^и зависит от метода конденсации, качества носителя и умения подобрать условия растворения образца для присоединения. Помимо конденсации при помощи двух указанных методов, можно с высоким выходом присоединять Пептиды через лактон гомосерина к ТЭТА-полистиролу, 3-аминопропилстеклу и ß-N-аминоэтил (3-аминопропил)стеклу. При работе с ТЭТА-полистиролом необходимы тщательное соблюдение условии синтеза самого ТЭТА-полимера, промывка носителя перед использованием и хранение его под азотом. Были предложены Носители других типов, например полимеры на основе поли-М-алкилакриламида [2, 10] или макропористых производных полистирола [26]. Но до сих пор эти смолы не нашли широкого применения для изучения структуры полипептидов, высушенных из биологических источников. С новыми подходами в создании носителей можно ознакомиться в главе 16.